蛋白免疫印迹( Western Blot) 是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF 膜上,然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术,现已广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。
Western Blot显色的方法主要有以下几种:
i. 放射自显影
ii. 底物化学发光ECL
iii. 底物荧光ECF
iv. 底物DAB呈色
现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色,体同水平和实验条件的是用第一种方法,发表文章通常是用底物化学发光ECL。只要买现成的试剂盒就行,操作也比较简单,原理如下(二抗用HRP标记):反应底物为过氧化物+鲁米诺,如遇到HRP,即发光,可使胶片曝光,就可洗出条带。
Phygene Western Blot 系列参考:
PH0316 RIPA裂解液(强) RIPA Lysis Buffer (Strong) 100ml
PH0317 RIPA裂解液(中) RIPA Lysis Buffer (Medium) 100ml
PH0318 RIPA裂解液(弱) RIPA Lysis Buffer (Mild) 100ml
PH0350 PMSF (100mM) 1.5ml / 10ml
PH0330 ECL化学发光检测试剂 50ml / 100ml
PH0353 "PhyLightTM ECL Plus超敏化学发光试剂盒
ECL Plus Ultra Sensitive Kit" 100ml / 200ml
PH0415 丽春红染色液 (Ponceau S Staining Solution) 100ml
PH0401 Western湿转转膜液(Western Transfer Buffer) 1L (干粉)
PH0402 Western半干转转膜液(Western Semi-dry Transfer Buffer) 1L (干粉)
PH0403 10×快速转膜液(Rapid Transfer buffer) 500ml
PH0405 BCIP/NBT即用型显色试剂盒 100ml
PH0406 Western及IP细胞裂解液 100ml
PH0410 TMB显色液 (沉淀型,组化或膜HRP显色用) 100ml
PH0421 TMB显色液(ELISA HRP显色用) 100ml
PH0411 红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer) 120ml
PH0491 Western一抗稀释液 100ml
PH0492 Western二抗稀释液 100ml
PH0412 Western封闭液(BSA) 100ml
PH0413 Western封闭液(Milk) 100ml
PH0414 Western封闭液(磷酸化抗体专用) 100ml
PH0416 AEC显色试剂盒(20×) 1ml
PH0417 DAB显色试剂盒(20×) 3ml / 10ml
PH0420 5% BSA封闭液 10ml / 100ml
PH0717 蛋白酶抑制剂(Aprotinin / 抑肽酶) 2mg / 5mg
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