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一、 原理
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测水产和鸡肉等组织样本中的AHD，在微孔条上预包被上偶联抗原，利用抗原与抗体的特异性免疫化学反应的原理来进行的，样本中的AHD和微孔条上预包被偶联抗原竞争抗呋喃妥因代谢物的衍生物抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样品中的AHD含量与样品的吸光度值呈反比，与标准曲线比较即可得出呋喃妥因代谢物含量。
二、 试剂盒技术指标：
试剂盒灵敏度： 0.1 ppb
样本检测下限：
组织、蜂蜜 0.2 ppb
鱼/虾等水产品组织因存在一定的干扰，检测下限为0.3 ppb
回收率：
鱼/虾水产组织 90%±15%
蜂蜜/鸡肉/肝脏样本 80%±15%
交叉反应率：
呋喃妥因代谢物 100%
呋喃唑酮代谢物 ﹤0.1%
呋喃它酮代谢物 ﹤0.1%
呋喃西林代谢物 ﹤0.1%
三、试剂盒组成
1．微量测试孔：96T/8孔
2．标准品液： 0 ppb、0.1 ppb、0.3 ppb、0.9 ppb、2.7 ppb、8.1 ppb（1.0 ml/瓶）
3．酶标记物 12 mL
4．抗体工作液 7 mL
5．底物缓冲液 7 mL
6．底物液 7 mL
7．终止液 7 mL
8．20倍浓缩洗涤液 50 mL
9．复溶液 50 mL
10．15.1 mg衍生化试剂
六、操作步骤
1、 将试剂盒从冷藏环境中取出并将所需试剂从试剂盒取出，置室温（20-25 ℃）平衡30 min以上, 注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2、 按需要取出微孔条及板架，将不用的微孔板重新密封，保存于2-8 ℃，不要冷冻。
3、 加标准品/样本50 µL /孔，然后加入抗体工作液50 µL/孔，再振荡混匀，用封板膜盖板，室温反应30 min。
4、 洗板4-5次，每次浸泡30 s，拍干。
5、 加入酶标记物100 µL /孔，用封板膜盖板，室温反应20 min。
6、 洗板4-5次，每次浸泡30 s，拍干。
7、 显色：每孔加入底物缓冲液50 µL，再加底物液50 µL，轻轻振荡混匀，25℃环境避光显色10 min。
8． 测定：每孔加入终止液50 µL，轻轻振荡匀，设定酶标仪于450 nm处（在20 min内读完数据），测定吸光度值。
七、结果判定
以标准品百分吸光率为纵坐标，以AHD标准品浓度（ng/ml）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中AHD实际浓度。
八、注意事项
1、室温低于20 ℃或试剂及样本没有回到室温（20-25 ℃）会导致所有标准的OD值偏低。
2、洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3、混合要均匀，洗板要彻底，否则会出现重复性不好的现象。
4、反应终止液为2 M硫酸，避免接触皮肤。
5、将不用的微孔板放进自封袋重新密封; 标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
6、不要使用过了有效日期的试剂盒，不要使用不同批号试剂盒中的试剂。
7、显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之，0标准的吸光度值小于0.6时，表示试剂可能变质。
九、储藏条件和保质期
储藏条件：试剂盒于2-8 ℃保存，不要冷冻。
保 质 期：该产品有效期为1年，生产日期见包装盒